Plates: 2AMF1 and 2AMF2
...
...
1
...
2
...
3
...
4
...
5
...
6
...
7
...
8
...
9
...
10
...
11
...
12
...
1
...
A
...
2
...
23
...
34
...
44
...
54
...
63
...
71
...
92
...
185
...
193
...
201
...
209
...
216
...
B
...
6
...
24
...
36
...
45
...
55
...
64
...
72
...
178
...
186
...
194
...
202
...
210
...
217
...
C
...
15
...
26
...
38
...
46
...
56
...
65
...
85
...
179
...
187
...
195
...
203
...
211
...
218
...
D
...
16
...
28
...
39
...
47
...
57
...
66
...
86
...
180
...
188
...
196
...
204
...
212
...
219
...
E
...
19
...
29
...
40
...
48
...
58
...
67
...
87
...
181
...
189
...
197
...
205
...
213
...
220
...
F
...
20
...
30
...
41
...
50
...
59
...
68
...
88
...
182
...
190
...
198
...
206
...
214
...
221
...
G
...
21
...
32
...
42
...
51
...
61
...
69
...
90
...
183
...
191
...
199
...
207
...
215
...
222
...
H
...
22
...
33
...
43
...
52
...
62
...
70
...
91
...
184
...
192
...
200
...
208
...
Blank
...
Blank2
Remaining 2 columns are Mock Community
3AMF1 and 3AMF2
PCR MasterMix
ul/rxn | Reagent | # of rxns | ul needed |
|---|---|---|---|
3 | 5X Kapa HiFi Buffer | 530 | 1590 |
0.45 | 10M dNTPs | 530 | 238 |
0.3 | Kapa HiFi HotStart DNA Pol | 530 | 159 |
7.25 | HPLC H2O | 530 | 3843 |
11 | Total Volume | 530 | 5830 |
Add 11 ul to each well of a hard shell, full skirt plate. Add 2 uL of primers and 2uL of template to each well.
Plate | 18S Primer | ITS |
|---|---|---|
2AMF13AMF1 | AMF01AMF04 | ITS0A9 |
AMF02AMF05 | ITS0B9 | |
2AMF23AMF2 | AMF04 | ITS0C9 |
Run AMF on thermocycler program AMF35:
...